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苯丙氨酸解氨酶
时间:2018-03-12 点击次数:327

苯丙氨酸解氨酶(Phenylalnine ammonialyase,PAL)试剂盒                            分光光度法  50管/48样

注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

PAL(EC4。  3 1  5)广泛存在于各种植物和少数微生物中,是植物体内苯丙烷类代谢的

关键酶,与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关,

在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。

测定原理

PAL催化  L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在 290nm处有zui大吸收值,

通过测定吸光值升高速率计算 PAL活性。

所需的仪器和用品

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1  mL石英比色皿、研钵、冰

和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液:液体 60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体 40mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×3 瓶,4℃保存。临用前每瓶加入 4mL  蒸馏水水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃保存;

试剂三:液体 2.5mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10的比例(建议称取约0。1g组织,加入1mL

提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

试剂名称(μL)

测定管

对照管

样本

20

 

试剂一

700

800

试剂二

200

200

混匀,30℃ 准确水浴  30min

试剂三

40

40

 

混匀,静置10min后,290nm处记录测定管吸光值A1和对照管吸光值A2,△A=A1-A2。

注意:对照管只要做一管

PAL活性计算

(1)按蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶

活性单位。

PAL(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(Cpr×V样)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性单位。

PAL(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,1.04mL;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液

体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;

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