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土壤酸性磷酸酶测试盒
时间:2019-10-30 点击次数:32

土壤酸性磷酸酶测试盒产品简介:

    土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响,根据最适pH范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。酸性环境中,S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。

产品内容:

试剂一:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。用前加50mL蒸馏水充分溶解。

试剂三:液体×1瓶,4℃保存。

试剂四:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加1152μL无水乙醇(自备),48μL蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用)

标准品:液体×1瓶,0。5μmol/mL苯酚标准液,4℃保存。

土壤酸性磷酸酶测试盒操作步骤:

一、粗酶液提取:   

称取风干混匀土壤约0.1g,加入0.05mL甲苯(自备),轻摇15min;加0.4 mL试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。8000rpm,25℃离心10min,取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤:

1.分光光度计预热30min以上,调节波长到660nm,蒸馏水调零。

2.空白管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL蒸馏水,100μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30 min,于660nm测定吸光度,记为A空白管。

3.标准管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL标准液,100μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A标准管。

4.测定管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL上清液,100 μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30 min,于660nm测定吸光度,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。

土壤酸性磷酸酶测试盒S-ACP活性计算: 

活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放1nmol酚为1个酶活单位。

S-ACP(nmol/d/g)=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W÷T 

=725×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W

C标准液:0。5μmol/mL;V总:催化体系总体积,1。45mL;W:土壤样品质量,g;T:催化反应时间,24 h=1d。

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