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竞争抑制法对ELISA的结果有哪些影响
时间:2019-05-28 点击次数:8
       ELISA测定模式包括以下几种:双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法,其中竞争抑制法因受操作时差所引起的不公平竞争等因素的影响,结果重复性较差,质量较难控制。
  ELISA测定一般遵循以下步骤:固相包被→加样品→温育→洗涤→加酶结合物→温育→洗涤→加底物→温育→显色→终止显色→比色
  目前各种形式的ELISA自动分析仪已经进入市场,如广泛应用于血站系统的微板式全自动酶免分析仪,其试剂为开放式的,而对于其它类型的,则试剂和仪器往往是配套的。但当前大部分医学实验室均采用手工操作加仪器测定的方式。ELISA操作步骤复杂,操作不当将引起较大的误差。以下叙述各个步骤中的影响因素。加样器是一种比较精密的工具,其在长时间使用时会因机械磨损或者推动杆内附着血痂等原因造成加样不准,尤其是对于样本量较大的临床实验室,因此必须定期对加液器进行维护和校准。每次加不同的标本时均需更换吸嘴,以免发生交叉污染。加样时速度不可太快,避免将标本加在孔壁上部,并注意不要溅出或产生气泡。加样时还应当注意操作时差对结果的影响,操作时差是指加入标本、试剂及混匀时间的差异。操作时差在每个实验中都存在,尤其是手工操作,日常检测标本多达几百个,从加入第一个标本到最后一个标本,需几十分钟,加入试剂及混匀等均存在着前后时间差异,使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致,操作时差对竞争法检测的结果影响更大,在加酶结合物和底物时可用定量多道。

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