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NP-40 裂解液
时间:2018-06-25 点击次数:225

NP-40 裂解液

产品简介:

    多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,如 Triton、SDS、NP-40 等。NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是采用一种温和的裂解方法获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于 PAGE 电泳、Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。

    Jisskang NP-40 Lysis Buffer 主要由Tris-HCl、NaCl、NP-40 以及sodium pyropho-sphate,β-glycerophosphate,sodium fluoride, EDTA等多种蛋白酶抑制剂组成。用NP-40 Lysis Buffer得到的蛋白,可以用BCA蛋白定量试剂盒和Bradford蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

产品组成:

   产品组成

   规格

Storage

NP-40 Lysis Buffer

   100ml

-20℃

PMSF(100mM)

1.5ml

-20℃

使用说明书

            1份

操作步骤(仅供参考):

(一)贴壁培养细胞

1、取NP-40 Lysis Buffer置于室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为 1mM。

2、去除贴壁细胞的培养液,用 PBS、NS 或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。

3、按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入NP-40 LysisBuffer 。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解15~30min,通常裂解液作用于细胞1~3s内,细胞就会被裂解。

4、10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)悬浮培养细胞

1、取 NP-40 Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,加入 PMSF,使 PMSF 终浓度为 1mM。低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。

2、用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150~200μl含有PMSF的裂解液的比例,加入NP-40 Lysis Buffer 。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200~250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

3、10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

4、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)组织样本

1、取 NP-40 Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,加入 PMSF,使 PMSF 终浓度为 1mM。把组织剪切成细小的碎片,越小越好。

2、取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。

3、按照每20mg组织加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解30~60min。

4、步骤3、4亦可以采用如下过程:按照每 20mg组织加入150~250μl裂解液的比例,加入含有PMSF的NP-40 Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,该过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。

5、10000~12000g,4℃离心5~15min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

6、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项:

1、在贴壁培养细胞的操作步骤中,去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。

2、如果裂解丌充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

3、在培养细胞的裂解中,如果细胞量较多,必需分装成 50~100 万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

4、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是丌如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

5、溶解 Leagene NP-40 Lysis Buffer 时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。

6、细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或 4℃进行。

7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:12个月有效。

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邮件:jskangchina@163.com
地址:山东青岛市青大工业园韩海路
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